显微镜下的生命 | Life beneath microscope

今天既然有空加上心情有点那个，就来说说一些，可能会比较有趣，或者开心的东西。

上次无聊时候说的那个无奖问答游戏有这个照片：



Valent的答案是对的！(恭喜！不过没有奖品)

它确实是一个显微镜。曾几何时，我对着这个东西，在一个小小的房间里，每天看着眼睛看不到的细微东西，过了不少日子。如今回想，还捏把冷汗，其实，我并不是一个特别喜欢看显微镜的人。一来用太多眼力我不喜欢，二来做Cell Culture Work需要太多的attention to details，non-flexible time，而且，很多repetitive work。不过，我还是以最大的耐力尽力工作了几年。:)

它的全貌是这样的：

以前没有上面的Olympus DSLR，是后来才dock上去的。有了相机可以拍下显微镜底下的东西，作为研究证物是很好的，比如说可以放在scientific publication上面。当时买那个DSLR相机，就花了好像2千多块新币了，而且还是没有镜头的~原因是，显微镜可以用自己的镜头。

有一次我很有空，就拿了相机跟显微镜拍了一些‘艺术照’，我觉得，它还蛮上镜的。哈哈。



其实整台显微镜都是Olympus的，因为这样所以DSLR也是选Olympus的。




下来是一些真实照片，是我拍的噢，就用那个昂贵的DSLR。

这是一个很well-defined的single colony，已经长得很大了，不用zoom得很大就能清楚看到一个colony。


放大看是这样子的：


再大一点：


最大的是这样。圆圆一粒粒的就是细胞。一粒圆圆是一个细胞，是一个活细胞！我在实验室培植的一直是动物细胞，所以没有植物细胞的图片可以看。这些都是活的动物癌细胞。


跟其他相机一样，我的Olympus DLSR也可以调color，呵呵。

蓝色美不美？


不然紫色？


或者灰色？


还是红色好？


这是另外一个照片。这些细胞是一个分裂两个，然后再分裂的，所以很常可以看到它们‘一串串’在一起，因为是刚分裂出来的。


这是cell counting chamber底下照到的，就是拿少量的细胞sample，放进去一个特别的chamber，它上面有一些格子，可以由此计算出总共有多少细胞在原来的样品里。计算细胞是很重要的process，太多细胞在一个容器里生活就会造成营养不良而死去，所以要控制它们的数量。活细胞就是亮亮的圈圈，而死的细胞就会被染成深蓝色。


这是一个很多很多细胞的容器里照的，看得出，很拥挤吧？它们应该不太开心。单这样看，就可以看到很多细胞一定已经死翘翘了。


左边可以看到一个巨型的colony，周围很多很多细胞。


就以此文，记我在实验室里跟显微镜工作的日子！并对那些如今还对着显微镜辛劳工作的人致敬！




Venus

美国科学家让老鼠心脏“死而复生”

死而复生，这以前听起来只有在科幻小说里面会出现的情节，现在已经越来越（甚至说已经）靠近真实了。

今天的新闻里，一群美国University of Minnesota的研究员上了电视，他们发表的研究成果是：他们让一个已经死掉的老鼠心脏，从新“活”了过来。

CNN新闻上写：

Researchers at the University of Minnesota were able to create a beating heart using the outer structure of one heart and injecting heart cells from another rat.

Their findings are reported in the journal Nature Medicine.

Rather than building a heart from scratch, which has often been mentioned as possible use for stem cells, this procedure takes a heart and breaks it down to the outermost shell. It's similar to taking a house and gutting it, then rebuilding everything inside. In the human version, the patient's own cells would be used.

"We took a rat heart and used soap to wash out the cells of the heart," said Doris Taylor, director of the Center for Cardiovascular Repair, Medtronic Bakken professor of medicine and physiology and lead author of the study.



下来是一些行内人会看懂的：

The process is called "decelluarization." To do this, Taylor and her team hung up the heart from a dead rat, introduced a regular soap solution into the top of the organ, and let gravity do the work. The soap moved through the heart's blood vessels, dissolving existing cells, which dropped out of the bottom. This process was repeated until only the outermost casing of the heart was left, resulting in a "white, almost gelatin-looking heart," Taylor explained. This would be the equivalent of the gutted house.


用一种实验室“肥皂”来run through这颗老鼠心脏，直到肥皂把里面的血管、细胞都“溶解”掉，留下一个白色的，近乎一个心脏框架的结构。再在这个结构里，注如另外一只新生老鼠的心脏细胞。新注入的细胞慢慢在这个框架里从新“生长”，直到最后变成一颗会跳动的心脏。

The rebuilding started with injecting new heart cells, in this case cells from baby lab rats, and pumping them through the heart. By treating the cells as heart cells would be treated and using a pacemaker to help them learn how to pump, they grew into a heart that could pump -- essentially rebuilding the organ's interior.

据悉，仅美国每年就有近5万人因等不到捐赠的心脏而死亡。科学家们指出，如果能将这种心脏“复活术”成功运用于人类，那么为病人进行移植所需的心脏和其他器官就不再是“一货难求”，许多病人的生命也将得以挽救。

不过这样在实验室里面做出来的心脏，离再造一个操作正常的人类心脏，似乎还有点距离。在in vitro情况下的心脏会跳动，如何放进一个活生生的动物身体，让它在in vivo情形下也能正常跳动？如何让新的心脏跟生物原本的血管连接？甚至如何在活体里面注入细胞？老鼠的心脏跟人类心脏还是有差别的，他们是否能在比较接近人类心脏的猪只心脏上成功重复这样的实验？

这些都是他们需要解决的问题。不管怎样，还是一项振奋人心的新研究成果~

恭喜他们！




Venus

我见过的诺贝尔奖得主

新加坡政府向来敛“才”如命，这样说不为过吧？看看A*STAR的International Advisory Board Members吧，里面就有三位诺贝尔奖得主了。

我在大学有过一个很好的教授。常常在他的课里，介绍到某些理论和发现时，顺道会介绍一下取得这个研究成果的科学家。而通常这些科学家，都是诺贝尔奖得主。

那么巧的就是，这三个跟新加坡A*STAR有关系的诺贝尔奖得主，都是曾经出现在我们课堂讨论里的人物。因此我对他们的印象非常深刻。而最为深刻的一个，恐怕就是因为我亲眼见过他本人---我见过诺贝尔奖得主本人，就在大学校园里面，而那时我还只是一个undergrad。

先介绍一下新加坡请到了哪三个Nobel Laureates来坐镇他们的A*STAR吧:

1) Dr. David Baltimore-这是一个大大的名字呢，在70年代以很年轻的年龄就拿到诺贝尔奖了。Baltimore是以发现reverse transcriptase而得奖的，读过cell biology的人会知道为什么他的发现那么重要。

比较年轻时的David Baltimore，呵呵。

2) Dr. Leland Hartwell-2001年得奖，以cell cycle research的贡献而得奖的。

3) Dr. Sydney Brenner-也是一个大号人物。2002年得奖，以他在C. elegans这种(虫？)的cell cycle研究而得奖。他早期也因为发现了mRNA而闻名。

现在都已经蛮老的Sydney Brenner。

现在在新加坡还比较active的就是Sydney Brenner了，甚至在A*STAR的主要网页上，还能看到news上面有Brenner的亮相。

可是让我印象最深刻的，就是Dr. Leland Hartwell。我忘了那年我几岁了，不记得是大学第几年，我们在学校的教堂里面，听了一堂由Dr. Leland Hartwell的特别lecture。本来以为是去听一个老伯伯的lecture，可是到了现场看到他本人，就彻底地改变了想法。先不说我本来就因为他的研究而觉得他很迷人，那怎么说也只是从课本上得来的印象而已。

我现在已经忘记了当时我们听的那堂课到底是讲什么内容的了，哈哈，可是，我还忘记不了的是，他从讲台上走下来时，活生生走在我的面前时，散发的那种魅力。

虽然他一头白发，可是身材蛮高大的。最重要是，他散发出一种充满智慧的帅气。

你可以了解吗？一个20出头的女大学生，觉得一个古稀之年的伯伯很帅？呵呵。


He's charming...haha...




Venus

Meet A*STAR

.
Foreword written by Venus, information extracted from http://www.a-star.edu.sg

To the biomedical/life science/engineering field players in Singapore, A*STAR is undoubtedly a very common name. Stands for Agency of Science, Technology and Research, it's a statutory board in Singapore, reknowned for its key role in the promotion of R&D of science and technology.

Under the A*STAR umbrella, there is this Biomedical Sciences Research Council (BMRC), that oversees the whole biomedical R&D in Singapore.




For a very basic understanding of the BMRC of A*STAR, meet its seven RIs (research institutes):

1) Bioinformatics Institute (BII):BII's research focus centres around knowledge discovery from biological data, exploiting high-end computing in biomedicine, advancing molecular imaging of biological processes, modelling of drug design and delivery, computational proteomics and systems biology. http://www.bii.a-star.edu.sg/

2) Biotechnology Institute (BTI): BTI has core expertise in expression engineering, animal cell technology, stem cells, microbial fermentation, product characterisation, downstream processing, purification and stability, with supporting proteomics and microarray platform technologies. http://www.bti.a-star.edu.sg/

3) Genome Institute of Singapore (GIS): As a centre for genomic discovery, GIS pursues the integration of technology, genetics, and biology towards the goal of individualised medicine.
http://www.gis.a-star.edu.sg/

4) Institute of Bioengineering and Nanotechnology (IBN): IBN researchers are directing their efforts towards six research areas that are both scientifically exciting and full of potential towards improving our health and quality of life. These include: nanobiotechnology, delivery of drugs, proteins and genes, tissue engineering, artificial organs and implants, medical devices, and biological and biomedical imaging.
http://www.ibn.a-star.edu.sg/

5) Institute of Medical Biology (IMB): IMB has a strategic, programme-directed portfolio of research focused on issues at the critical interface between basic science and medicine. The aim is to facilitate the development of translational research by building bridges between clinical and basic science. http://www.imb.a-star.edu.sg/

6) Institute of Molecular and Cell Biology (IMCB): IMCB has established itself as a world-class research institute in biomedical sciences with core strengths in cell cycling, cell signaling, cell death, cell motility and protein trafficking. http://www.imcb.a-star.edu.sg/

7) Singapore Institute of Clinical Sciences (SICS): SICS accelerates the translation of basic discoveries into new diagnostics and therapeutics. SICS will be distinguished by its focus on clinical science and the use of innovative approaches and technologies that enable the efficient and effective study of human health and disease. http://www.sics.a-star.edu.sg/

动物实验感想篇

关于老鼠实验，写到这里，也七七八八了，也算是分享了一些比较普遍的技术。至于其他的个别技术，因人而异，而且涉及范围其实很广，也就没必要在这里多谈了。

其实除了老鼠之外，动物实验的对象还有很多，每种不同的动物都有一些不一样的实验技术，所以要掌握好个别技术，最好的办法还是实际练习！所谓practise makes perfect，是千古不变的道理啦。

至于心理建设，还是很重要的。我认为坚定的心很必要，只要坚定自己的心，就能把事情做好，也不会那么受到外来因素影响到了心情。我这里所形容的其实都是很基本的实验行为，再“残酷”再“恐怖”的还有很多。嗯。。。

最重要，是知道自己在做什么，想要达到什么，对吗？



Venus

ps：不知不觉，我停止动物实验已经快1年了，时间啊真是飞逝。问我会想念做动物实验的日子吗？我回答不出来，一个看起来很简单的问题，它的答案背后其实有许多情绪啊。

注：
http://www.amazon.com/Laboratory-Mouse-Handbook-Experimental-Animals/dp/0123364256 - 一 本讲Laboratory Mouse的书本。
http://ihome.ust.hk/~webacf/files/Mice/mice-tech.ppt - 一个网络上找到的关于老鼠实验的概括，但具体procedure因人而异，只用作reference就好。

图片取自http://www.petwebsite.com/mice/feeding_mouse_food.htm。

纳米生物科技

今天花了不少时间
做literature search
现在眼睛累累的

做完这些搜查之后
心里有点小感触
好像我站在这个山头很久了
现在赶下去另外一个山头
然后发觉我要去的那个山头
就是大家沸沸扬扬在讨论的热门山头


现在有点担心是，那个山头会不会很难爬？哈哈。

对于所谓的“纳米技术”
应该不觉得陌生吧
可是常常从电视科技频道或者新发现频道听到的词语
到底是什么意思呢？有没有想过？

Wiki是这样解释的：
Nanotechnology is a field of applied science and technology covering a broad range of topics. The main unifying theme is the control of matter on a scale smaller than 1 micrometre, normally approximately 1 to 100 nanometers, as well as the fabrication of devices of this size. It is a highly multidisciplinary field, drawing from fields such as applied physics, materials science, colloidal science, device physics, supramolecular chemistry, and even mechanical and electrical engineering. Much speculation exists as to what new science and technology may result from these lines of research. Nanotechnology can be seen as an extension of existing sciences into the nanoscale, or as a recasting of existing sciences using a newer, more modern term.



Nanotechnology这个词是在1974年由一位日本科学教授所提出的
从那时候开始到了现在
所谓的纳米技术发展到了多方多面
几乎任何一种科学技术
只要是有nanometer的dimension都可以considered as nanotechnology吧

看看BBC怎样介绍Nanotechnology吧，很复杂的科技也能有很简单的解释的，:)


既然大家都有自己的nanotechnology
生物界也开始出现bionanotechnology的名词出来
但实际上，生物学家很早以前就在做nanotechnology了
不是吗？我们每个人身体里面的DNA，就是nanometer的大小的
人类开始对DNA有真正突破性的了解时是在1953年左右吧
所以说生物学家是不是比较有前瞻性？哈哈



离题了离题了
重点是
虽然我要爬上去的是大山头中的一个小小的山角
但也蛮开心的
至少我踏的是最热辣的一淌水
嘿~

加油！
(休息一下眼睛)
(以便看更多的资料去~)





Venus

做研究的乐趣

有时候我生产部的同事会问我
“你那么喜欢做研究咩？”
“以后也是要做这样的工？”
“有酱好玩啊？”

我不是每次都能给到一个很标准的答案
哈哈

但今天下午
盯着那滚动的硅油时
我心里充满了答案
“为什么我喜欢做研究”的答案

今天早上来到办公室
就在网络上找了很多可以找到的资料
想要给我这两天来的迷思找个合理的解答
收集到了自己认为足够的资料后
就开始动手验证

当我看见以自己逻辑分析出来的办法正在奏效时
那种满足感不言而喻
就像我以前“研究”出怎样很有效地给老鼠的尾巴打针时一样

就是那种“原来我的想法也能成功”的感觉

做研究会面对失败是无法避免的事
所谓trial and error
trial and error

有一天当你把error变成success时
How do you feel?

C-O-N-T-E-N-T-E-D




Venus

化学的美

今天这篇不是关于生物的
是化学

我隔好久了
没有做过真正的化学实验

今天七手八脚做了一个化学实验
开始时是有点混乱啦
我呆望着那beaker的水
心想什么时候水才沸

就这样很考验耐心地盯着眼前的东西
很久很久
看着水里的泡泡越来越多
水滚了吗？水滚了吗？
(为什么平常在家煲水不用这么麻烦~)
一边瞄那支温度计
100度了吗100度了吗

然后在瞬间我变了一点魔术
接着
最美妙的事情发生了
我的眼睛看着淡黄色的“水”
慢慢变成浅蓝色。。。
深蓝色。。。
更深的蓝色。。。
黑色？？。。。
黑红色。。。
珠红色。。。

最后
变成我跟Mars最喜欢喝的red wine color
哈哈~~~

我今天是化学师~呼呼~




Venus

Euthanasia --- 老鼠的安乐死

动物科学实验做到某个阶段，就需要牺牲动物了。

有可能是你需要对它做的行为是terminal action，意即会造成它死亡的；或者在一定时间之后实验要停止，所以就要结束研究，也结束研究对象的生命。不管理由是什么，事实是，实验老鼠的命运就是这样。它们生下来就在实验室的笼子里长大，也会在实验室里结束生命的。当然，有一些比较幸运的，也会活到2岁多，然后自然老死---我们的老鼠就曾经有过这样的。

结束老鼠的生命有几种方法，大概如下：
1) carbon dioxide asphyxiation (二氧化碳窒息)
2) cervical dislocation (颈椎脱位)
3) decapitation (斩首)

二氧化碳和颈椎脱位我都对老鼠做过。二氧化碳比较人道，不那么疼痛。把老鼠放进紧封的容器里，然后灌入二氧化碳。大概5分钟左右老鼠就会不省人事了。它们死前会极力挣扎，也会排尿排便，但整个过程还很快的。要确保老鼠已经死过去了，也可以大力压它的脚趾，没有反射作用就代表死了。

二氧化碳箱子
http://www.aaronlogan.com/blog/03/02/27/CO2.jpg

二氧化碳窒息
http://www.aaronlogan.com/blog/03/02/27/lastmoments.jpg

颈椎脱位可以拿一枝坚硬的东西，比如一支够长的tweezer，或者干脆用手指，先用一只手抓住老鼠尾巴，然后在它的颈项的后面位置横放下你的武器或手指，用来压住老鼠的，再在后面尾巴大力拉一下。感觉到颈项位置松了就成功了。颈椎脱位一般需要经过麻醉才做，不然还蛮残忍的。通常经过颈椎脱位后，解剖了老鼠，还可以看到心脏在跳的。有时候甚至不肯定，老鼠的双眼是不是还能看到我在对它做什么。

颈椎移位
http://oslovet.veths.no/teaching/mouse/techniques/rederive/1a.jpg

不过说到残忍，还是斩首最残忍啦。我自己本身没有斩过别的动物，倒是听说过同学做过这事情。以前我们写论文那年，我有个同学，做跟哮喘病有关的研究，因此需要很多气管，当时她是用guinea pig的气管。听她叙述是，把动物稍微麻醉了之后，就要斩首了。断头台放在sink旁边的地方，把动物的头放置好在正确的位置，就一刀斩下去。她说，那一刻血就喷在sink里，头也会咚咚掉进去sink里去。但做研究的人不能傻眼或呆滞，还要在斩首之后马上对气管进行解剖，而且要丝毫不差，才能完好无缺地把动物的气管拿出来，并在最短的时间内对气管进行实验。

断头台
http://www.kentscientific.com/products/productView.asp?ProductId=6205

啊。。。现在说起来还觉得残忍，不知道当时她是怎么接受的。我只记得自己曾陪她去祈祷过几次，所以说，做科学的人内心还是有感受的。

另外，有些人要对动物进行cardiac puncture。做法是把动物弄昏迷后，然后拿一支特别大的针，就从动物的皮插进去心脏里面去，也不用解剖什么的，再把心脏里的血拿出来。这种就是terminal action，取完血了之后动物自然是活不成了。这种做的目的是为了取大量的血液(也可以说是全部的血液)，或者是研究最后一个步骤，再也不需要老鼠了。

http://research.uiowa.edu/animal/mp1.jpg

http://ihome.ust.hk/~webacf/files/Mice/mice-tech.ppt

虽然说杀老鼠这种行为他们叫做Euthanasia，翻译了是“安乐死”，但老鼠到底是不是死得安乐我就不得而知了。至于我自己手刃了多少白老鼠，也无从考究了。我只是知道，我做到已经没什么感觉了，有时候把老鼠放进去了“毒气箱”后，我看着它挣扎，看着它排泄，最后死去。。。我的脑子里却平静得很，除了实验，除了工作，也没想什么东西。偶尔在等它死的时候，会想，我真的好像没什么感觉了噢？这样是不是很糟糕呢？。。。

不知道啦。。。




Venus

注：http://research.uiowa.edu/animal/?get=euthanasia - 形容Euthanasia的不同方法

Blood collection via orbital sinus --- 眼窝取血

单看“眼窝取血”这四个字，就会觉得恐怖了。确实是挺恐怖的，不过其实不是从眼球取的血，是眼窝里的血管，但还是很可怕的。其实取血的方法有很多中(见reference)，从眼窝取血只是其中一种，其他的比较普遍的还包括尾巴静脉(tail vein)取血、脚静脉(saphenous vein)取血、心脏取血(cardiac puncture)。

http://www.umic.sunysb.edu/newitems/LAB1607.pdf

http://www.umic.sunysb.edu/newitems/LAB1607.pdf

http://www.umic.sunysb.edu/newitems/mouseblood.pdf

眼窝取血首先要麻醉老鼠。老鼠麻醉了之后就可以开始进行了。如果有助手帮忙就更好，因为这个过程一个人两只手比较难应付。

要准备的东西包括pasteur pipette或者haematocrit tubes(用来取血的)，然后还有收集血液样本的小eppendorf tubes，和纱布。

首先把取血的“武器”对准老鼠眼睛的medial canthus，然后呢，在老鼠目睽睽之下，对了，就“插”进去吧。Medial canthus是眼睛的旁边，不是眼球中间噢。当然插进去的时候不能很大力，要慢慢施力，而且轻轻转动武器。目的是要戳破里面的血管，破了之后血就会流出来，就轻轻把武器提出来一点点，这时因为capillary action血液会自动流上pasteur pipette或者haematocrit tubes里。

http://www.umic.sunysb.edu/newitems/mouseblood.pdf

http://research.uiowa.edu/animal/mp5.jpg


http://research.uiowa.edu/animal/mp6.jpg

替小鼠取血有限制，不能取太多，不然它会失血过多。一般我取100-200microlitres已经很足够了。血取得差不多时，就要把武器交给助手，让他负责把武器中的血液放进小瓶子里，他可以用一个pipette bulb把pasteur pipette里的血液弄出来。而我自己呢，就要在这时马上拿着纱布盖住老鼠的眼睛，以止血，这个步骤非常重要。

通常按了一段短时间后就能移开，移开时用纱布让老鼠的眼皮盖着。如果过程做得好，一般不会给老鼠造成太大伤害。但是如果技巧不好，会造成老鼠失明的噢。

如果戳了很久还是没有血出来，可能是位置错了，角度错了，反正一定有东西错了就对。最重要是能很快地针对情况找到对策。因为你不可能一直不停地戳半个小时的。

以前我做这个步骤，是不替老鼠打麻醉针的，就这样用手restraint着老鼠，然后活生生这样插进去。有时候会听到老鼠疼痛而呻吟的叫声，感觉到老鼠在我的紧握之下不停尝试挣扎，弄到我的手都开始抖了，但又要镇定，不然会拖更久。所以眼球取血是我觉得最难受的行为之一，也是让我觉得自己最残忍的行为。当时我常常告诉自己，自己的行为是为了科学，为了工作，不是为了满足自己的欲望。

那时候取了血之后放开老鼠时，它已经快要奄奄一息了，也不怎么会动弹，就躺在那里，很辛苦的样子。可以想象这样的过程有多疼痛。有大概两只老鼠在这样的严重trauma下突然暴毙。我当时心里还蛮难过的。

后来终于跟上司争取到要使用麻醉针才取血。少了老鼠的挣扎和呻吟却不代表心里难受的感觉也会跟着减少。做一个研究员，心理建设还真的很重要的。

所以呢，从眼睛取窝就是这样啦，但这个过程需要不少勇气和坚定的心。有些事情不能失手，也不能重做，眼球取窝就是这样的一种事情。想想看，如果你戳了很久还不成功，老鼠已经承受了那么多的伤害，你还要三番四次尝试，这样是不是对它来说很残酷？

还是那句，胆大心细。




Venus

注：

http://www.umic.sunysb.edu/newitems/mouseblood.pdf - 很好的文章，介绍了各种取血方法。
http://www.umic.sunysb.edu/newitems/LAB1607.pdf - 详细介绍了从saphenous vein取血http://www.ibms.sinica.edu.tw/html/sup2/tech_sup.html(中文) - 各种取血方法简介
http://research.uiowa.edu/animal/?get=mse_tech - 各种取血方法简介

麻醉针来了！

在进行动物实验时，某些procedure，比如说从眼球里取血，比较疼痛，因此一定要进行麻醉(anaesthesia)。

麻醉有许多办法，也有很多不同的麻醉药。看注脚的reference。

一般打小鼠我用的是Ketamine/Xylazine。麻醉药的剂量非常重要，根据老鼠的重量而定。如果打得太少的话，老鼠可能因为太疼痛而醒来，但如果打得太多，老鼠则会因为overdose而长眠不醒噢！

打麻醉针一般用IP。通常打了一两分钟后老鼠就会开始失去平衡(它们失去平衡跌跌撞撞的样子挺可爱的，呵呵)，然后再等一下子就不省人事了。如果要确保老鼠已经真的被麻醉了，就再多等一下子啦。麻醉药可以持续好几个小时的。

老鼠睡着了之后你就可以做你要做的事情了。

做好了之后如果担心老鼠还是不是活着，可以大力捏老鼠的脚趾，如果它还活着，会有reflex action把脚突然伸直的，这个反应很大，不会错过的。

一般简单的procedure不必等到老鼠醒来才离开的，当然，如果可以，一直monitor老鼠的表现就更好啦。




Venus

注：

http://www.umic.sunysb.edu/newitems/AAALACAnesthAnalg.doc - 一篇很好的文章，介绍了所有的anaesthetics & analgesics。
http://research.uiowa.edu/animal/?get=aa_regimens_mice - 也介绍了各种麻醉药。

图片取自http://www.networksplus.net/cburb/englishmicepix/mousesleepingoncheese.jpg。

Intravenous Injection (IV) --- 静脉注射

IV比IP困难许多，我练习了非常久了之后，才抓到窍门。由于当时没有一个人能指导我，所以我的IV技术可说是完全自己摸索出来的。当我遇到困难时，找了许多课本、网络，可是读了却做不出来，果然theory跟practical之间还是有差距的。一般书本所形容的IV很简洁，但实际情况要复杂许多，因此不先训练，是一定打不好静脉针的。

照例，打针之前，先量体重、准备要打的液体、做好稀释、load好进针筒里面。准备好完这些后，就开始要抓老鼠了。

但打IV不能靠普通的restraint方法，因为打静脉要很固定的，不能有丝毫动摇。因此需要一个restrainer，就是一个小小的塑胶东东，来困住老鼠，但它的尾巴可以掉出来。你就抓住它的尾巴，然后往尾巴上的静脉打针。

http://research.uiowa.edu/animal/mp3.jpg

这个restrainer一定要把老鼠牢牢地关在里面，一点都不能动才可以。这时就要尽量把老鼠压在里面，压成一团也没问题，只要不要弄到它骨折，或者呼吸困难就可以了。

一般老鼠虽然喜欢关在一个圆圆的筒子里，但因为IV需要的是绝对的动弹不得，所以它会被关压到蛮不舒服的。而且老鼠不喜欢别人去碰它的尾巴的，所以打尾巴针对它们来说是相当痛的。如果不牢牢困住，就算有一点点的位置，它也会挣扎的，它一挣扎，你就打不到了。

为什么那么困难呢？就是因为老鼠尾巴的静脉其实不大，很小而已，只要稍微移动，很容易就打错地方了。

打静脉的针头我一般用30G，是比26G更加细的针头。

我把步骤简化如下：

1) 把针尖向下，即bevel up，这样比较容易刺进去，位置也能很精准

http://pharmlabs.unc.edu/parenterals/equipment/needle_parts.gif

http://www.pegasys.com/images/sub/injecting-pegasys.jpg

2) 从尾巴的最后面开始试，不要一开始就刺比较靠近身体的部位，因为如果弄错了，还可以一直往上继续试，但如果一刺就刺靠近身体的，就没办法再上了

3) 老鼠尾巴有静脉的地方会泛有红色的，就对准红色的线条

4) 尾巴要抓紧，不要有丝毫动摇，有时候老鼠会挣扎，就要大力一点抓尾巴

5) 刺进去时，尽量把针摆得跟尾巴越平行越好，因为稍微有一点角度就打不进去了(平行的话针就会在血管里面，如果有角度可能会刺过血管到血管下面的组织去)

6)可以尽量刺深一点，只要是平行就好，刺得够深的话整支针可以挂在那里不会掉下来的

7)往后拉一拉plunger，如果看到血，位置就对了！

8)位置对的话，保持针的不动，然后注射，注射的时候会觉得很顺畅，而且可以亲眼看到红色的血管慢慢被你所注射的液体所flushed，所以红色就会慢慢变成白色

9)最后把针拉出来，针口的位置会流一点血(代表真的是血管嘛)，然后用一块棉花按按扎针的部位就可以了



那错误又会怎样发生咧？举例如下：

1) 明明是看到自己刺到红色的线条了，可是往后拉的时候没看到血，只是感觉真空压力，这时就可以肯定刺错位置了，刺到尾巴的其他组织上，要拉出来再找一个地方刺，一般不要再刺回同样一个位置

2) 开始注射后发现很难注射，plunger遇到很大的阻力似的，其实这也是打错了，不在血管里面就会这样，这时你就会看到你打针的部位周围开始泛白，但这个泛白跟血管里面泛白不同，这个泛白就围绕在你打针的部位，而且尾巴的那个部分会开始肿胀。如果你强迫注射完进去，就发觉尾巴那里变大了，因为你所注射的液体都集中在这个部分的组织里，没有进去血管

3) 有时候一开始时注射时没问题，似乎注射进了血管，可是注射到一半突然感觉阻力来了，感觉不在血管里面了，这可能是因为你的针移位了，或者老鼠的尾巴动了

4) 如果注射错误，泛白了的尾巴部位就再也看不到血管了，因此才要从越下面开始尝试越好，因为你刺错后还可以往上在找找看别的位置刺，如果一开始就刺在很上面的位置而且刺错了，要从下面再注射是很困难的，因为上面已经充斥着肿胀的组织，要成功更加困难了

5)另外有一些时候，刺的时候发觉有血流出来，以为在对位置了，可是开始注射时就注射不进去，这可能跟针的角度有关系，角度不对就不容易进去，反而会注射到外面去

怎样可以帮助注射呢？除了要一个很好的restrainer之外，还有一个重要的步骤，就是要给尾巴加温。因为加温之后静脉会放大，放大了之后就比较容易注射。一般我的做法是注射之前拿一盏很热的灯，照老鼠的尾巴大概5分钟左右，才开始注射。这个办法很有用的，如果没有加温，效果差别很大。

还有一个TIPS，就是不要擦酒精。酒精有点凉，擦在已经加温后的尾巴上面会马上给尾巴降温。我每次擦了酒精之后都打得很困难的，所以还是不擦酒精比较实际。

如果万事顺利，打静脉针也可以很快的。最好是做好好事前准备，如果可以第一次注射就成功就是最好了。第一次如果不成功，之后就要更加小心仔细了，不然最后可能落得老鼠的整条尾巴都被刺得白白了，已经没有新的位置可以尝试了---然后你的实验做不成功罗！

如果你折磨了老鼠很久才成功的话，老鼠放出来之后会很agitated，情绪会受到一点影响。但是如果做得干净利落，老鼠不会觉得怎样的。

好啦，就是这样啦，说是容易，做啊，可真的要许多练习咧！



Venus

注：
http://www.rit.edu/~gtfsbi/hytc/PDFfiles/Intravenous.pdf - 解释IV的步骤

http://www.ibms.sinica.edu.tw/html/sup2/tech_sup.html (中文) - 各种注射方法的简介

http://research.uiowa.edu/animal/?get=mse_tech - 各种注射方法的简介